Mga Prinsipyo sa Nucleic Acid Synthesis

Ang nucleic acid synthesis gihimo gamit ang solid phase sialic amide triglyceride method, diin ang 3′ end sa DNA immobilized sa solid phase substrate ug ang mga nucleotide idugang sa 3′ to 5′ nga direksyon hangtod ma-synthesize ang gusto nga DNA fragment. .Kini lahi sa DNA synthesis pinaagi sa paggamit sa DNA polymerase.

Ang 3′ nga katapusan sa unang base dili mapalihok sa CPG sa panahon sa synthesis, ang 5′-OH sa sunod nga base gipanalipdan sa di-p-tolyl trityl DMT, ang amino group sa base gipanalipdan sa benzoic acid ug ang 3′ -OH unya activate sa usa ka amino phosphate compound.Ang 1 base sa 5 5′-OH sa 1 base ug 3′-OH sa sunod nga base nagporma og phosphite triglyceride, nga unya ma-oxidize sa iodine ngadto sa phosphate triglyceride, ang protectant sa ikaduhang base nga 5′-OH kuhaon sa pagdugang sa dichloroacetic acid DM cycles pinaagi sa pagdugang sa sunod nga base, ug human sa synthesis ang protectant sa 5′-OH gikuha sa usa ka mahuyang nga acid Ang tipik giputol gikan sa solid resin nga adunay concentrated ammonium hydroxide, ang protectant gikuha gikan sa base nga adunay concentrated ammonium hydroxide ubos sa pagpainit, ang ammonium hydroxide gikuha, ang tipik gipauga sa vacuum, ug ang nucleic acid giputli pinaagi sa liquid chromatography o PAGE.

Mga Lakang sa Oligo Synthesis

Pag-deblock

AngAng 5 katapusan nga grupo sa pagpanalipod sa DMT gikuha pinaagi sa pagdugang sa solusyon sa TCA.

Pagpaaktibo

Pagsagol sa activator sa oligonucleotide monomer aron maporma ang aktibo nga oligonucleotide monomer intermediate.

Pagdugtong

Ang 5-terminal nga hydroxyl nga grupo nag-reaksyon sa aktibo nga oligonucleotide intermediate sa usa ka anti-generative condensation reaction aron maporma ang usa ka dili lig-on nga phosphite triglyceride bond.

Pagtabon 

Ang pagdugang sa usa ka ahente sa capping naghimo sa usa ka acetylation capping nga reaksyon nga adunay sobra nga hydroxyl nga mga grupo nga wala maapil sa reaksyon sa condensation.

Oxidation 

Ang pagdugang sa iodine nga solusyon nga adunay tubig mo-react sa dili lig-on nga phosphite bonds pinaagi sa oxidation aron maporma ang stable nga phosphoric acid triglyceride bond.

Cyanoethyl Cleavage

Ang produkto sa nucleic acid human sa synthesis, uban ang pagdugang sa DEA nga solusyon aron makuha ang cyanoethyl nga grupo gikan sa phosphate triglyceride bond.

Giputol ug Deproteksiyon

Ang mga tipik sa nucleic acid gibuak gikan sa solid phase carrier pinaagi sa pagdugang sa usa ka concentrated ammonium hydroxide solution ug dayon gipainit aron makuha ang mga proteksiyon nga grupo gikan sa hydrogen bonds sa mga base.