Ang sukaranang prinsipyo sa DNA synthesis

Ang kemikal nga DNA synthesis gibase sa solid-phase synthesis nga estratehiya ug phosphoramidite chemistry.Lahi sa biological DNA synthesis, ang materyal sa kemikal nga DNA synthesis mao ang DMT (4, 4-dimethoxytrityl) ug phosphoramidite nga giusab nga deoxyriboxyside, ingon sa gipakita sa Figure 1. Ang DNA synthesis gihimo sa solidong suportaOligo Synthesis Column), ie CPG (controlled pore glass) ug PS (polystyrene), ug ang tibuok synthesis gihimo sa usa kaDNA/RNA synthesizer, nga mao ang atong nag-unang ekipo, adunay lain-laing mga modelo sama sa: HY Single Channel Synthesizer, HY-12, HY-192 ug uban pa, ang synthesis direksyon gikan sa 3 'ngadto sa 5', ug ang usa ka nucleotide gipaila-ila ngadto sa solid nga suporta pinaagi sa usa siklo sa synthesis.Ang kasagarang siklo sa synthesis adunay upat ka mga lakang, Deprotection, Coupling, Capping ug Oxidation (Figure 2).Ang Deprotection gikatakda nga tangtangon ang DMT nga grupo sa solidong suporta o ang 5' hydroxyl group sa miaging nucleoside, ang 3% trichloroacetic acid sa dichloromethane gigamit isip deprotection reagent.Unya ang phosphoramidite giusab deoxyriboxyside gitugotan sa exposure hydroxyl grupo uban sa tabang sa activator, ie 5-ethylthiotetrazole o 4, 5-dicyanoimidazole, pagporma sa phosphitetriester (III), ug nakaamgo sa Coupling lakang.Ang usa ka lakang sa Capping gihimo aron babagan ang wala ma-react nga hydroxyl nga grupo sa panahon sa pagdugtong nga lakang, aron maminusan ang pagporma sa dili gusto nga mga han-ay sa depekto.Sa katapusan, ang dili lig-on nga phosphitetriester (III) gi-oxidize ngadto sa kemikal nga stable nga phosphotriester (V) nga adunay iodine isip oxidant sa presente sa pyridine.

Ang synthesized DNA mahimong cleavage gikan sa solidong suporta pinaagi sa aminolysis, ang 2-cyanoethyl protected group sa phosphotriester ug ang amide sa nucleobase gibuak sa samang higayon, ang Synthesis Plates ug Synthesis Columns sa mga racks gibutang direkta sa reaction chamber saDeproteksiyon nga Kagamitan.Ang krudo nga DNA mahimong maandam sa HPLC, electrophoresis ug OPC kung gipangayo, mahimo usab namon ihatag kanimo angKagamitan sa Pagputlialang sa Post-processing.